GB 4789.3-2016食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)的操作原則和常見(jiàn)問(wèn)題解答

GB 4789.3-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)是食品微生物學(xué)檢驗(yàn)的一項(xiàng)重要標(biāo)準(zhǔn)，其中包括對(duì)大腸菌群計(jì)數(shù)的兩種方法：大腸菌群MPN法和平板計(jì)數(shù)法。本文將介紹這兩種方法的操作原則以及常見(jiàn)問(wèn)題的解答。

大腸菌群MPN法是一種常用的檢測(cè)方法

適用于固體和液體樣品。根據(jù)樣品限量值，可以在MPN表中查找相應(yīng)的數(shù)值，然后按照以下步驟進(jìn)行取樣：

1. 若限量值小于3.0或在MPN表中能找到其他數(shù)值，取樣量為0.1g（mL）、0.01g（mL）或0.001g（mL），分別在3管單料LST肉湯管中接種不同稀釋倍數(shù)的樣品勻液。

2. 若限量值小于0.3或在MPN表中能找到縮小10倍的數(shù)值，取樣量為10mL的樣品1:10稀釋液，在3管雙料LST肉湯管和3管單料LST肉湯管中接種不同稀釋倍數(shù)的樣品勻液。

在大腸菌群MPN法中，若有產(chǎn)酸或產(chǎn)氣的LST管，需要在GBLB肉湯管中進(jìn)行進(jìn)一步接種，并將產(chǎn)氣者標(biāo)記為陽(yáng)性。

平板計(jì)數(shù)法是另一種常用的檢測(cè)方法

以下是一些關(guān)于VRBA培養(yǎng)的常見(jiàn)問(wèn)題及解答：

1. 器皿是否需要滅菌？不需要。配制培養(yǎng)基所使用的器皿無(wú)需滅菌，但必須清洗干凈并無(wú)殘留物。

2. 如何保持“煮沸2min”？可以使用電磁爐或電熱板進(jìn)行加熱煮沸，不必完全按照2分鐘進(jìn)行，數(shù)秒即可，因?yàn)橹蠓泻笈囵B(yǎng)基會(huì)迅速上涌、翻騰。

3. 是否可以冷藏未用完的培養(yǎng)基？不可以。固體培養(yǎng)基最多只能熔融一次，而且VRBA培養(yǎng)基熔融后再次熔融非常容易噴涌，應(yīng)當(dāng)在培養(yǎng)基完全凝固或半凝固后再傾注一層培養(yǎng)基。

4. 傾注完成后是否需要覆蓋一層？一般情況下不需要覆蓋。初次接觸該樣品類(lèi)別時(shí)，可以在傾注培養(yǎng)基時(shí)覆蓋一層，但若經(jīng)過(guò)多次測(cè)試沒(méi)有菌落蔓延情況，則不需要進(jìn)行覆蓋。

如何確定培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的是大腸菌群？建議按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn)，每次有菌落生長(zhǎng)時(shí)進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn)，重復(fù)3-4次以確定大腸菌群的形態(tài)。

如果兩個(gè)連續(xù)梯度的平板上都有菌落，可以選擇15-150CFU之間的平板，并挑選可疑菌落進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn)。

證實(shí)實(shí)驗(yàn)中，建議挑選所有不同形態(tài)的菌落進(jìn)行檢驗(yàn)，每種形態(tài)挑選5-10個(gè)菌落，并注意篩選BGLB管，將產(chǎn)氣的管子排除。

結(jié)果計(jì)算根據(jù)證實(shí)的大腸菌群數(shù)量來(lái)進(jìn)行，首先在VRBA培養(yǎng)后24小時(shí)內(nèi)計(jì)數(shù)，然后經(jīng)過(guò)證實(shí)實(shí)驗(yàn)后計(jì)算可疑和典型大腸菌群的數(shù)量。最終大腸菌群數(shù)的計(jì)算公式如下：經(jīng)證實(shí)的大腸菌群數(shù) = 可疑大腸菌群經(jīng)證實(shí)的數(shù)量 × 10 ×（3／10） + 典型大腸菌群經(jīng)證實(shí)的數(shù)量 × 10 ×（5／6）。

若平板上有很多菌落但全部為陰性，需要挑選更低稀釋度平板上的菌落進(jìn)行再次證實(shí)實(shí)驗(yàn)，如果仍然為陰性，則計(jì)算結(jié)果為＜1乘以最低稀釋度。